通過不(bu)同(tong)(tong)顏色熒(ying)(ying)光(guang)(guang)標(biao)(biao)記不(bu)同(tong)(tong)的(de)靶標(biao)(biao)，可以直觀的(de)觀察(cha)同(tong)(tong)一樣品細(xi)(xi)胞(bao)內(nei)不(bu)同(tong)(tong)結(jie)(jie)構和(he)蛋白。熒(ying)(ying)光(guang)(guang)標(biao)(biao)記靶標(biao)(biao)的(de)方法(fa)(fa)主要包(bao)括熒(ying)(ying)光(guang)(guang)染料、免(mian)疫(yi)(yi)標(biao)(biao)記、熒(ying)(ying)光(guang)(guang)融合蛋白等——這(zhe)幾(ji)種(zhong)(zhong)方法(fa)(fa)均可選擇性標(biao)(biao)記細(xi)(xi)胞(bao)內(nei)的(de)結(jie)(jie)構和(he)蛋白，讓您(nin)在成像時更(geng)輕松地進行觀察(cha)。細(xi)(xi)胞(bao)生物學(xue)采用(yong)的(de)很多(duo)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)工具基本上都(dou)是(shi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)基團(tuan)(tuan)。這(zhe)些(xie)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)基團(tuan)(tuan)經(jing)過不(bu)同(tong)(tong)的(de)方法(fa)(fa)修(xiu)飾(shi)或(huo)結(jie)(jie)合到不(bu)同(tong)(tong)的(de)分子上，從而具備了某些(xie)的(de)功能(neng)與(yu)特(te)定的(de)細(xi)(xi)胞(bao)器或(huo)蛋白結(jie)(jie)合。通過化學(xue)修(xiu)飾(shi)，單個熒(ying)(ying)光(guang)(guang)基團(tuan)(tuan)可以產生許多(duo)變體形式，且每種(zhong)(zhong)變體都(dou)有(you)不(bu)同(tong)(tong)的(de)特(te)異性。免(mian)疫(yi)(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)細(xi)(xi)胞(bao)化學(xue)技術用(yong)于顯示(shi)和(he)檢查細(xi)(xi)胞(bao)或(huo)組織內(nei)的(de)抗(kang)原或(huo)半(ban)抗(kang)原物質(zhi)。collagenX(COL-10)免(mian)疫(yi)(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)試驗

細胞(bao)免(mian)疫(yi)熒(ying)(ying)光實(shi)驗注(zhu)意事(shi)項：非(fei)特異(yi)性(xing)(xing)染(ran)(ran)(ran)色：是(shi)否滅(mie)活內(nei)源性(xing)(xing)過(guo)氧化物(wu)酶；孵(fu)育過(guo)程中(zhong)干片(pian)；抗原(yuan)熱修復過(guo)度(du)。染(ran)(ran)(ran)色過(guo)深：一(yi)抗濃(nong)度(du)過(guo)高(gao)(gao)；染(ran)(ran)(ran)色試濃(nong)度(du)過(guo)高(gao)(gao)或孵(fu)育時間過(guo)長；染(ran)(ran)(ran)色劑濃(nong)度(du)過(guo)高(gao)(gao)或孵(fu)育時間過(guo)長。通(tong)常(chang)實(shi)驗室先固定細胞(bao)再進行通(tong)透(tou)，但若檢(jian)測(ce)抗原(yuan)是(shi)水(shui)不溶性(xing)(xing)蛋(dan)白，可(ke)先通(tong)透(tou)再固定，這樣(yang)可(ke)以通(tong)過(guo)通(tong)透(tou)去(qu)除(chu)(chu)一(yi)些水(shui)溶性(xing)(xing)蛋(dan)白，進而可(ke)降低免(mian)疫(yi)熒(ying)(ying)光背景和非(fei)特異(yi)性(xing)(xing)信號；建議設陰性(xing)(xing)對照組，消除(chu)(chu)由于抗體(ti)非(fei)特異(yi)性(xing)(xing)結合而產生的(de)背景染(ran)(ran)(ran)色；選擇醛類固定液(ye)時，保持其新鮮(xian)度(du)，較好現配現用，使用不新鮮(xian)的(de)醛類固定液(ye)自發熒(ying)(ying)光背景會升高(gao)(gao)。collagenX(COL-10)免(mian)疫(yi)熒(ying)(ying)光試驗免(mian)疫(yi)熒(ying)(ying)光技術利用熒(ying)(ying)光染(ran)(ran)(ran)料(liao)標記的(de)抗體(ti)與目(mu)標分子結合，從而實(shi)現可(ke)視化檢(jian)測(ce)。

免疫(yi)熒(ying)(ying)光應用范(fan)圍(wei)：其應用范(fan)圍(wei)極其普遍，可(ke)以測定內分(fen)泌、蛋白質(zhi)、多肽、核酸、神經遞質(zhi)、受(shou)體、細(xi)胞(bao)(bao)因子(zi)、細(xi)胞(bao)(bao)表面抗原、肉(rou)瘤標志物(wu)、血(xue)藥濃度等(deng)各(ge)種生物(wu)活性(xing)物(wu)質(zhi)。根據診(zhen)斷類別，又可(ke)分(fen)為傳染(ran)性(xing)疾病、內分(fen)泌、藥物(wu)檢測、免疫(yi)學、血(xue)型鑒定等(deng)。許多物(wu)質(zhi)都可(ke)產生熒(ying)(ying)光現象，但(dan)并(bing)(bing)非都可(ke)用作熒(ying)(ying)光色(se)素(su)。只(zhi)有那(nei)些能產生明顯的(de)(de)熒(ying)(ying)光并(bing)(bing)能作為染(ran)料使用的(de)(de)有機(ji)化合物(wu)才能稱(cheng)為免疫(yi)熒(ying)(ying)光色(se)素(su)或熒(ying)(ying)光染(ran)料。異硫氰酸熒(ying)(ying)光素(su)為黃色(se)或橙(cheng)黃色(se)結晶粉末，易(yi)溶(rong)于水或酒(jiu)精等(deng)溶(rong)劑。分(fen)子(zi)量為389.4，較大吸(xi)收光波長為490495nm，較大發射(she)光波長520530nm，呈現明亮的(de)(de)黃綠(lv)色(se)熒(ying)(ying)光。

熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)的(de)產(chan)生(sheng)(sheng)：一(yi)此化學(xue)物質(zhi)能(neng)從外(wai)界(jie)吸收并儲存(cun)能(neng)量(liang)（如光(guang)(guang)(guang)能(neng)、化學(xue)能(neng)等）而進入激(ji)發(fa)(fa)態(tai)，當其從激(ji)發(fa)(fa)態(tai)再(zai)回復到基態(tai)時，過剩的(de)能(neng)量(liang)可(ke)以電磁輻射(she)(she)的(de)形式(shi)放射(she)(she)（即發(fa)(fa)光(guang)(guang)(guang)）。熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)發(fa)(fa)射(she)(she)的(de)特點(dian)是：可(ke)產(chan)生(sheng)(sheng)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)的(de)分子或原子在接受能(neng)量(liang)后即刻引(yin)起(qi)(qi)發(fa)(fa)光(guang)(guang)(guang)；而一(yi)旦(dan)停止(zhi)供能(neng)，發(fa)(fa)光(guang)(guang)(guang)（熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)）現(xian)象也(ye)隨之在瞬間內消失。可(ke)以引(yin)起(qi)(qi)發(fa)(fa)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)的(de)能(neng)量(liang)種類很多(duo)，由光(guang)(guang)(guang)激(ji)發(fa)(fa)所(suo)引(yin)起(qi)(qi)的(de)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)稱為致熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)。由化學(xue)應所(suo)引(yin)起(qi)(qi)的(de)稱為化學(xue)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)，由X線或陰(yin)(yin)極(ji)射(she)(she)線引(yin)起(qi)(qi)的(de)分別稱為X線熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)或陰(yin)(yin)極(ji)射(she)(she)線熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)。熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)免(mian)疫技術(shu)一(yi)般應用致熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)物質(zhi)進行標記。免(mian)疫熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)技術(shu)可(ke)以用于(yu)研究細(xi)胞內蛋(dan)白質(zhi)的(de)定位和表(biao)達水平。

免(mian)疫熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)間接(jie)法測抗(kang)體實驗(yan)注意事項：1）熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)染色后一(yi)般在(zai)1h內完成觀察，或(huo)于(yu)4℃保存(cun)4h，時(shi)間過(guo)長(chang)，會使熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)減(jian)弱。2）每次試驗(yan)時(shi)，需設置以(yi)下(xia)三種(zhong)對照(zhao)：①陽性(xing)(xing)對照(zhao)：陽性(xing)(xing)血(xue)清+熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)標(biao)(biao)記物(wu)②陰(yin)(yin)性(xing)(xing)對照(zhao)：陰(yin)(yin)性(xing)(xing)血(xue)清+熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)標(biao)(biao)記物(wu)③熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)標(biao)(biao)記物(wu)對照(zhao)：PBS+熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)標(biao)(biao)記物(wu)3.已知(zhi)抗(kang)原標(biao)(biao)本片(pian)需在(zai)操作(zuo)的各個步驟(zou)中，始終(zhong)(zhong)保持濕(shi)潤，避免(mian)干(gan)燥。4.所滴加(jia)的待檢抗(kang)體標(biao)(biao)本或(huo)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)標(biao)(biao)記物(wu)，應始終(zhong)(zhong)保持在(zai)已知(zhi)抗(kang)原標(biao)(biao)本片(pian)上，避免(mian)因放置不平使液體流失，從而(er)造成非特異性(xing)(xing)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)染色。免(mian)疫熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)技(ji)術可(ke)以(yi)用(yong)于(yu)研究植物(wu)病(bing)理(li)學和農業(ye)生產(chan)。COL-2免(mian)疫熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)染色

在實際工(gong)作中，熒(ying)光抗(kang)原技術(shu)應用較少，因此通常將(jiang)其稱為熒(ying)光抗(kang)體技術(shu)或免疫(yi)熒(ying)光技術(shu)。collagenX(COL-10)免疫(yi)熒(ying)光試驗

細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)免疫(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)實驗注(zhu)(zhu)意事項(xiang)：1、建議細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)直接種孔板(ban)，采用(yong)(yong)倒置(zhi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)顯微(wei)鏡拍(pai)照(zhao)，這樣可以避免然后(hou)挑片(pian)(pian)時造(zao)(zao)成(cheng)劃片(pian)(pian)或細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)片(pian)(pian)破(po)損(sun)以及然后(hou)封片(pian)(pian)可能造(zao)(zao)成(cheng)滑片(pian)(pian)等結果；2、若(ruo)實驗室(shi)只(zhi)有(you)正置(zhi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)顯微(wei)鏡，則需(xu)要將(jiang)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)植于細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)爬(pa)片(pian)(pian)。建議直接購買處理過(guo)的細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)爬(pa)片(pian)(pian)；若(ruo)只(zhi)有(you)普通細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)爬(pa)片(pian)(pian)，可以先將(jiang)爬(pa)片(pian)(pian)于濃(nong)酸（濃(nong)酸腐蝕性(xing)強，注(zhu)(zhu)意操作）或 75% 乙(yi)醇(chun)浸(jin)泡(pao)過(guo)夜，若(ruo)用(yong)(yong)酸浸(jin)泡(pao)過(guo)夜，第二天先用(yong)(yong)自(zi)來水(shui)小心沖(chong)洗掉爬(pa)片(pian)(pian)殘留的酸液，若(ruo)用(yong)(yong) 75% 乙(yi)醇(chun)浸(jin)泡(pao)，則不(bu)需(xu)要此步驟。然后(hou)，用(yong)(yong)洗潔精搓洗爬(pa)片(pian)(pian)，然后(hou)用(yong)(yong)去離(li)子水(shui)清洗爬(pa)片(pian)(pian)。置(zhi)于烘(hong)箱 80 ℃ 烘(hong)干(gan)，再將(jiang)爬(pa)片(pian)(pian)置(zhi)于超凈臺造(zao)(zao)紫外消毒(du)后(hou)備用(yong)(yong)。collagenX(COL-10)免疫(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)試驗

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