通過(guo)不(bu)同(tong)顏色熒光(guang)(guang)標記(ji)不(bu)同(tong)的(de)(de)靶(ba)標，可以直觀的(de)(de)觀察(cha)同(tong)一樣品細胞(bao)(bao)(bao)內(nei)不(bu)同(tong)結構(gou)和(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)。熒光(guang)(guang)標記(ji)靶(ba)標的(de)(de)方(fang)法(fa)主(zhu)要包括熒光(guang)(guang)染料、免疫標記(ji)、熒光(guang)(guang)融合(he)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)等——這幾(ji)種方(fang)法(fa)均可選(xuan)擇性(xing)標記(ji)細胞(bao)(bao)(bao)內(nei)的(de)(de)結構(gou)和(he)(he)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)，讓您在成像時更輕松地進行(xing)觀察(cha)。細胞(bao)(bao)(bao)生物(wu)學采用的(de)(de)很多熒光(guang)(guang)工具基(ji)本(ben)上都是(shi)熒光(guang)(guang)基(ji)團(tuan)。這些(xie)熒光(guang)(guang)基(ji)團(tuan)經過(guo)不(bu)同(tong)的(de)(de)方(fang)法(fa)修(xiu)飾(shi)或(huo)結合(he)到(dao)不(bu)同(tong)的(de)(de)分子上，從(cong)而具備了某(mou)些(xie)的(de)(de)功(gong)能與特定的(de)(de)細胞(bao)(bao)(bao)器或(huo)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)結合(he)。通過(guo)化(hua)學修(xiu)飾(shi)，單個熒光(guang)(guang)基(ji)團(tuan)可以產生許(xu)多變(bian)體形式，且每種變(bian)體都有不(bu)同(tong)的(de)(de)特異性(xing)。免疫熒光(guang)(guang)細胞(bao)(bao)(bao)化(hua)學技術用于顯示(shi)和(he)(he)檢查細胞(bao)(bao)(bao)或(huo)組織內(nei)的(de)(de)抗原或(huo)半抗原物(wu)質。collagenX(COL-10)免疫熒光(guang)(guang)試驗(yan)

細胞免(mian)疫熒光實(shi)(shi)驗注意(yi)事項：非(fei)(fei)特異(yi)性染(ran)色(se)：是否(fou)滅(mie)活內源(yuan)性過(guo)(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)；孵育(yu)過(guo)(guo)程(cheng)中干片；抗原熱修復過(guo)(guo)度。染(ran)色(se)過(guo)(guo)深：一(yi)抗濃(nong)度過(guo)(guo)高(gao)；染(ran)色(se)試(shi)濃(nong)度過(guo)(guo)高(gao)或(huo)孵育(yu)時間(jian)過(guo)(guo)長(chang)；染(ran)色(se)劑濃(nong)度過(guo)(guo)高(gao)或(huo)孵育(yu)時間(jian)過(guo)(guo)長(chang)。通(tong)常實(shi)(shi)驗室先固定細胞再(zai)進(jin)(jin)行通(tong)透(tou)，但若檢測(ce)抗原是水不(bu)溶性蛋白，可(ke)先通(tong)透(tou)再(zai)固定，這樣可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)(guo)通(tong)透(tou)去(qu)除(chu)一(yi)些水溶性蛋白，進(jin)(jin)而(er)可(ke)降低免(mian)疫熒光背(bei)(bei)景(jing)和非(fei)(fei)特異(yi)性信號(hao)；建議設陰性對照組，消除(chu)由(you)于抗體非(fei)(fei)特異(yi)性結合(he)而(er)產生的(de)背(bei)(bei)景(jing)染(ran)色(se)；選擇醛(quan)類(lei)固定液時，保持其新(xin)鮮度，較好現(xian)配現(xian)用，使用不(bu)新(xin)鮮的(de)醛(quan)類(lei)固定液自(zi)發(fa)熒光背(bei)(bei)景(jing)會升(sheng)高(gao)。collagenX(COL-10)免(mian)疫熒光試(shi)驗免(mian)疫熒光技(ji)術利用熒光染(ran)料標(biao)記的(de)抗體與目標(biao)分子結合(he)，從(cong)而(er)實(shi)(shi)現(xian)可(ke)視化(hua)檢測(ce)。

免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)應用范(fan)圍(wei)(wei)：其應用范(fan)圍(wei)(wei)極其普遍，可(ke)以(yi)測(ce)定內分泌、蛋白(bai)質(zhi)(zhi)、多肽(tai)、核(he)酸、神經(jing)遞(di)質(zhi)(zhi)、受體、細(xi)胞(bao)(bao)因子、細(xi)胞(bao)(bao)表面抗原、肉瘤(liu)標(biao)志物(wu)(wu)、血(xue)藥濃度等各(ge)種生物(wu)(wu)活性物(wu)(wu)質(zhi)(zhi)。根據(ju)診(zhen)斷類別(bie)，又(you)可(ke)分為(wei)傳(chuan)染(ran)性疾(ji)病、內分泌、藥物(wu)(wu)檢測(ce)、免(mian)疫(yi)學、血(xue)型(xing)鑒定等。許多物(wu)(wu)質(zhi)(zhi)都可(ke)產(chan)生熒(ying)光(guang)(guang)(guang)現象，但(dan)并非(fei)都可(ke)用作熒(ying)光(guang)(guang)(guang)色(se)素。只有那(nei)些能產(chan)生明顯的(de)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)并能作為(wei)染(ran)料使用的(de)有機(ji)化合物(wu)(wu)才能稱為(wei)免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)色(se)素或(huo)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)染(ran)料。異(yi)硫氰酸熒(ying)光(guang)(guang)(guang)素為(wei)黃色(se)或(huo)橙黃色(se)結晶(jing)粉末，易溶于水或(huo)酒精等溶劑。分子量為(wei)389.4，較大吸(xi)收光(guang)(guang)(guang)波長(chang)為(wei)490495nm，較大發射光(guang)(guang)(guang)波長(chang)520530nm，呈現明亮的(de)黃綠色(se)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)。

熒(ying)光(guang)(guang)的(de)(de)(de)(de)(de)產生：一(yi)此化(hua)(hua)學(xue)物質(zhi)能(neng)從外界吸(xi)收(shou)并(bing)儲存能(neng)量（如光(guang)(guang)能(neng)、化(hua)(hua)學(xue)能(neng)等）而進入激發(fa)(fa)(fa)(fa)態(tai)，當其(qi)從激發(fa)(fa)(fa)(fa)態(tai)再回復到基態(tai)時，過(guo)剩(sheng)的(de)(de)(de)(de)(de)能(neng)量可以電磁輻(fu)射的(de)(de)(de)(de)(de)形式放(fang)射（即(ji)(ji)發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang)）。熒(ying)光(guang)(guang)發(fa)(fa)(fa)(fa)射的(de)(de)(de)(de)(de)特點是：可產生熒(ying)光(guang)(guang)的(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)子(zi)(zi)或原子(zi)(zi)在(zai)接受能(neng)量后(hou)即(ji)(ji)刻引(yin)起(qi)(qi)發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang)；而一(yi)旦停止供能(neng)，發(fa)(fa)(fa)(fa)光(guang)(guang)（熒(ying)光(guang)(guang)）現象(xiang)也隨之在(zai)瞬間內(nei)消失。可以引(yin)起(qi)(qi)發(fa)(fa)(fa)(fa)熒(ying)光(guang)(guang)的(de)(de)(de)(de)(de)能(neng)量種類很多(duo)，由光(guang)(guang)激發(fa)(fa)(fa)(fa)所引(yin)起(qi)(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)熒(ying)光(guang)(guang)稱(cheng)為(wei)致熒(ying)光(guang)(guang)。由化(hua)(hua)學(xue)應(ying)(ying)所引(yin)起(qi)(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)稱(cheng)為(wei)化(hua)(hua)學(xue)熒(ying)光(guang)(guang)，由X線或陰極(ji)射線引(yin)起(qi)(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)別稱(cheng)為(wei)X線熒(ying)光(guang)(guang)或陰極(ji)射線熒(ying)光(guang)(guang)。熒(ying)光(guang)(guang)免(mian)(mian)疫(yi)技(ji)術(shu)一(yi)般應(ying)(ying)用致熒(ying)光(guang)(guang)物質(zhi)進行標記。免(mian)(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)(guang)技(ji)術(shu)可以用于研究細胞內(nei)蛋白質(zhi)的(de)(de)(de)(de)(de)定位和表達水平。

免疫(yi)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)間接法(fa)測(ce)抗(kang)(kang)體實驗注意事項(xiang)：1）熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)染色后(hou)一般在1h內完成(cheng)觀察，或于(yu)4℃保存4h，時(shi)(shi)間過長，會使(shi)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)減弱。2）每次(ci)試驗時(shi)(shi)，需(xu)設(she)置以下三種對(dui)(dui)照：①陽性對(dui)(dui)照：陽性血清(qing)+熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)標(biao)(biao)(biao)記(ji)(ji)物②陰(yin)性對(dui)(dui)照：陰(yin)性血清(qing)+熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)標(biao)(biao)(biao)記(ji)(ji)物③熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)標(biao)(biao)(biao)記(ji)(ji)物對(dui)(dui)照：PBS+熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)標(biao)(biao)(biao)記(ji)(ji)物3.已知(zhi)抗(kang)(kang)原標(biao)(biao)(biao)本片需(xu)在操作的(de)各個步(bu)驟中，始終(zhong)保持濕潤，避(bi)(bi)免干(gan)燥。4.所滴加的(de)待檢抗(kang)(kang)體標(biao)(biao)(biao)本或熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)標(biao)(biao)(biao)記(ji)(ji)物，應(ying)始終(zhong)保持在已知(zhi)抗(kang)(kang)原標(biao)(biao)(biao)本片上(shang)，避(bi)(bi)免因(yin)放置不平使(shi)液體流失(shi)，從而(er)造成(cheng)非特異(yi)性熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)染色。免疫(yi)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)技術可以用于(yu)研(yan)究植(zhi)物病理學和(he)農業生(sheng)產。COL-2免疫(yi)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)染色

在實際工作中，熒光抗(kang)原技(ji)術(shu)應用較少，因此(ci)通常將(jiang)其稱(cheng)為(wei)熒光抗(kang)體技(ji)術(shu)或免疫(yi)熒光技(ji)術(shu)。collagenX(COL-10)免疫(yi)熒光試驗(yan)

細(xi)(xi)胞(bao)免(mian)疫(yi)熒光(guang)(guang)實(shi)驗注意事項：1、建(jian)議細(xi)(xi)胞(bao)直接(jie)種孔板(ban)，采用(yong)倒置熒光(guang)(guang)顯微鏡(jing)拍(pai)照，這(zhe)樣可(ke)以避(bi)免(mian)然(ran)后(hou)(hou)(hou)挑片(pian)(pian)(pian)時造(zao)成(cheng)(cheng)劃片(pian)(pian)(pian)或細(xi)(xi)胞(bao)片(pian)(pian)(pian)破損以及然(ran)后(hou)(hou)(hou)封(feng)片(pian)(pian)(pian)可(ke)能造(zao)成(cheng)(cheng)滑片(pian)(pian)(pian)等結果；2、若(ruo)實(shi)驗室只(zhi)有正置熒光(guang)(guang)顯微鏡(jing)，則需要將細(xi)(xi)胞(bao)植于(yu)細(xi)(xi)胞(bao)爬(pa)(pa)(pa)片(pian)(pian)(pian)。建(jian)議直接(jie)購買處理(li)過(guo)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)爬(pa)(pa)(pa)片(pian)(pian)(pian)；若(ruo)只(zhi)有普通(tong)細(xi)(xi)胞(bao)爬(pa)(pa)(pa)片(pian)(pian)(pian)，可(ke)以先將爬(pa)(pa)(pa)片(pian)(pian)(pian)于(yu)濃(nong)酸(suan)(suan)（濃(nong)酸(suan)(suan)腐(fu)蝕性強，注意操作）或 75% 乙醇(chun)浸(jin)泡(pao)過(guo)夜，若(ruo)用(yong)酸(suan)(suan)浸(jin)泡(pao)過(guo)夜，第二天(tian)先用(yong)自來水(shui)小心(xin)沖洗(xi)掉(diao)爬(pa)(pa)(pa)片(pian)(pian)(pian)殘(can)留的(de)酸(suan)(suan)液，若(ruo)用(yong) 75% 乙醇(chun)浸(jin)泡(pao)，則不需要此步驟。然(ran)后(hou)(hou)(hou)，用(yong)洗(xi)潔精搓洗(xi)爬(pa)(pa)(pa)片(pian)(pian)(pian)，然(ran)后(hou)(hou)(hou)用(yong)去離(li)子水(shui)清(qing)洗(xi)爬(pa)(pa)(pa)片(pian)(pian)(pian)。置于(yu)烘(hong)箱 80 ℃ 烘(hong)干，再將爬(pa)(pa)(pa)片(pian)(pian)(pian)置于(yu)超凈臺造(zao)紫外(wai)消毒后(hou)(hou)(hou)備(bei)用(yong)。collagenX(COL-10)免(mian)疫(yi)熒光(guang)(guang)試驗

本文來(lai)自沈(shen)陽喜納多采暖工程有限公司(si)：//zjlong.cn/Article/13e399940.html