準備(bei)DNA-PEI復(fu)(fu)合(he)物(wu)：DNA、PEI試(shi)劑(ji)(ji)和稀釋(shi)劑(ji)(ji)在(zai)進行以下(xia)步驟前需先(xian)使其升(sheng)至室(shi)溫。依(yi)據表1所示(shi)，用(yong)Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合(he)的(de)無蛋白培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)稀釋(shi)適量DNA。用(yong)同樣的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)稀釋(shi)PEI試(shi)劑(ji)(ji)。每1μgDNA需用(yong)2-5μL線(xian)性PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)。一邊(bian)輕輕渦(wo)旋裝有(you)DNA溶液的(de)試(shi)管，一邊(bian)將稀釋(shi)的(de)線(xian)性PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)滴(di)加(jia)至試(shi)管中（注意：請(qing)(qing)勿顛倒添(tian)加(jia)順(shun)序）。充分混勻后(hou)，室(shi)溫靜置10~25min以形(xing)成(cheng)DNA-PEI復(fu)(fu)合(he)物(wu)。當(dang)溶液體積較大時，請(qing)(qing)用(yong)圓(yuan)底聚丙烯管，例(li)如Falcon5mL/14mL離心管。3.轉(zhuan)(zhuan)染(ran)細(xi)胞(bao)：直(zhi)接向每個孔中加(jia)入(ru)DNA-PEI復(fu)(fu)合(he)物(wu)并輕輕渦(wo)旋培(pei)(pei)養(yang)(yang)板/培(pei)(pei)養(yang)(yang)皿。在(zai)無血清(qing)條(tiao)件下(xia)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)時，去除(chu)生(sheng)長培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)，替換成(cheng)無血清(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)，然(ran)后(hou)滴(di)DNA-PEI復(fu)(fu)合(he)物(wu)。轉(zhuan)(zhuan)染(ran)3h后(hou)，添(tian)加(jia)?體積的(de)包含30%血清(qing)的(de)生(sheng)長培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)。更多關于Polysciences PEI相關內容歡迎(ying)咨詢上(shang)海曼博生(sheng)物(wu)！如想申(shen)請(qing)(qing)PEI試(shi)用(yong)裝，請(qing)(qing)關注我們的(de)公(gong)眾號(hao)：Mine-bio，回(hui)復(fu)(fu)關鍵詞“PEI申(shen)請(qing)(qing)”，即可參加(jia)！?有(you)哪些不錯的(de)PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)品牌？山(shan)東高(gao)效率(lv)PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)試(shi)用(yong)裝

PEIMAX粉末配置(zhi)方法：1)將(jiang)(jiang)1gPEIMAX40K放入盛有(you)900mL水的(de)(de)(de)玻璃燒杯(bei)中(zhong)；2)放入攪(jiao)拌(ban)(ban)轉(zhuan)子(zi)，放置(zhi)于磁(ci)力攪(jiao)拌(ban)(ban)器上，設(she)置(zhi)攪(jiao)拌(ban)(ban)程序以形(xing)成(cheng)一個(ge)較小(xiao)的(de)(de)(de)漩渦；3)等待PEIMAX40K完全溶解，通常需要5分(fen)(fen)鐘左(zuo)右(you)；4)用(yong)(yong)(yong)(yong)25mL塑料移液(ye)管(guan)加入1N氫氧(yang)化鈉(na)滴定至pH6.9~7.1；5)如果不(bu)小(xiao)心超過(guo)(guo)7.1，則使用(yong)(yong)(yong)(yong)1N的(de)(de)(de)鹽(yan)酸和(he)新的(de)(de)(de)塑料移液(ye)管(guan)將(jiang)(jiang)pH重新滴定至6.9~7.1；6)將(jiang)(jiang)溶液(ye)轉(zhuan)移到1L玻璃量筒中(zhong)，加入水定容至1L；7)用(yong)(yong)(yong)(yong)無菌真(zhen)空過(guo)(guo)濾膜過(guo)(guo)濾配制的(de)(de)(de)轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)溶液(ye)；8)按需分(fen)(fen)裝，4°C儲存（切記不(bu)可(ke)(ke)冷凍(dong)）；注(zhu)：未經配制的(de)(de)(de)粉末有(you)效期為2年(nian)(nian)。配置(zhi)成(cheng)液(ye)體后分(fen)(fen)裝在(zai)合(he)適的(de)(de)(de)瓶(ping)子(zi)中(zhong)，并(bing)且保存在(zai)4℃的(de)(de)(de)轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)將(jiang)(jiang)可(ke)(ke)在(zai)6個(ge)月之內(nei)(nei)保持性(xing)能。如jin用(yong)(yong)(yong)(yong)于蛋(dan)白定性(xing)研究，分(fen)(fen)裝的(de)(de)(de)轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)可(ke)(ke)延長有(you)效使用(yong)(yong)(yong)(yong)期至1年(nian)(nian)。如想申(shen)請(qing)PEI試(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)裝，請(qing)關注(zhu)我們的(de)(de)(de)公眾(zhong)號：Mine-bio，回復關鍵詞“PEI申(shen)請(qing)”，即可(ke)(ke)參加！非脂質體PEI轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)試(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)裝可(ke)(ke)高(gao)效轉(zhuan)染(ran)多種類型(xing)細(xi)胞(bao)PEI MAX 是一款高(gao)度濃縮的(de)(de)(de)粉劑(ji)(ji)，大(da)量科學家選擇PEI MAX ，在(zai)內(nei)(nei)部自行制備(bei)低成(cheng)本高(gao)效益的(de)(de)(de)PEI轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)。

接種細(xi)(xi)胞(bao)(bao)：轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)前(qian)，用(yong)膠原酶(mei)（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xi)(xi)胞(bao)(bao)并計數（不(bu)建議用(yong)胰(yi)酶(mei)）。調整細(xi)(xi)胞(bao)(bao)濃(nong)度(du)，將細(xi)(xi)胞(bao)(bao)鋪入(ru)(ru)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)的(de)(de)(de)器皿，每(mei)(mei)(mei)個孔置(zhi)入(ru)(ru)的(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)量(liang)應能使轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)時細(xi)(xi)胞(bao)(bao)匯合(he)(he)度(du)達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合(he)(he)物：DNA、PEI試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)和稀(xi)釋(shi)劑(ji)在(zai)進(jin)行以下步驟前(qian)需(xu)先使其升(sheng)至室溫(wen)。依據表1所示，用(yong)Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他(ta)適合(he)(he)的(de)(de)(de)無蛋白培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)稀(xi)釋(shi)適量(liang)DNA。用(yong)同樣的(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)稀(xi)釋(shi)PEI試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)。每(mei)(mei)(mei)1μgDNA需(xu)用(yong)1.5-5μL線性PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(這(zhe)個需(xu)要(yao)客戶(hu)自行摸索配(pei)比，每(mei)(mei)(mei)一(yi)批轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)和每(mei)(mei)(mei)一(yi)批DNA比例(li)可能會稍(shao)有不(bu)同）。一(yi)邊(bian)輕輕渦(wo)旋(xuan)裝有DNA溶液的(de)(de)(de)試(shi)(shi)(shi)(shi)管(guan)(guan)，一(yi)邊(bian)將稀(xi)釋(shi)的(de)(de)(de)線性PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)滴加(jia)(jia)(jia)(jia)至試(shi)(shi)(shi)(shi)管(guan)(guan)中（注(zhu)意：請(qing)勿顛倒(dao)添加(jia)(jia)(jia)(jia)順序）。充(chong)分混勻后(hou)，室溫(wen)靜置(zhi)10~25min以形成(cheng)DNA-PEI復合(he)(he)物。當溶液體積較大(da)時，請(qing)用(yong)圓(yuan)底聚丙烯(xi)管(guan)(guan)，例(li)如NEST5mL/14mL離心管(guan)(guan)。3.轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)：直接向每(mei)(mei)(mei)個孔中加(jia)(jia)(jia)(jia)入(ru)(ru)DNA-PEI復合(he)(he)物并輕輕渦(wo)旋(xuan)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)板/培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)皿。在(zai)無血清條件(jian)下轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)時，去除(chu)生(sheng)長培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)，替換成(cheng)無血清培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)，然后(hou)滴DNA-PEI復合(he)(he)物。轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)1.5h后(hou)，添加(jia)(jia)(jia)(jia)?體積的(de)(de)(de)包含30%血清的(de)(de)(de)生(sheng)長培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)。更多關于Polysciences PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)，歡迎咨詢曼(man)博生(sheng)物！想(xiang)申(shen)請(qing)PEI試(shi)(shi)(shi)(shi)用(yong)裝，請(qing)關注(zhu)我們的(de)(de)(de)公眾號：Mine-bio，回復關鍵(jian)詞“PEI申(shen)請(qing)”，即可參加(jia)(jia)(jia)(jia)！

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對于某(mou)些類型的(de)(de)(de)細胞(bao)如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和(he)COS細胞(bao)，在(zai)轉染(ran)前(qian)兩天鋪(pu)(pu)板(ban)可顯(xian)著提高轉入基(ji)(ji)因的(de)(de)(de)表達水平(ping)。如果選擇轉染(ran)前(qian)兩天鋪(pu)(pu)板(ban)，可適當(dang)降低(di)鋪(pu)(pu)板(ban)密度，以(yi)確保轉染(ran)時細胞(bao)的(de)(de)(de)匯合度仍為70~80%。2.對于接(jie)觸抑制敏感的(de)(de)(de)細胞(bao)，可適當(dang)降低(di)鋪(pu)(pu)板(ban)密度。3.即使(shi)(shi)在(zai)有蛋(dan)白（如10%的(de)(de)(de)血清）存在(zai)的(de)(de)(de)情況下，DNA-PEI復合物(wu)仍能轉染(ran)細胞(bao)，但(dan)是DNA-PEI復合物(wu)必須在(zai)無蛋(dan)白存在(zai)的(de)(de)(de)條件下形(xing)成。我們推薦(jian)使(shi)(shi)用Opti-MEMITM培養基(ji)(ji)以(yi)達到*轉染(ran)效(xiao)率。其他的(de)(de)(de)無蛋(dan)白培養基(ji)(ji)則(ze)需(xu)測試(shi)與線性PEI轉染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)的(de)(de)(de)兼容性。更多關于PEI轉染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)相關產品問題，歡迎咨詢上海曼博生物(wu)！?如想申(shen)(shen)請PEI試(shi)用裝，請關注我們的(de)(de)(de)公(gong)眾號：Mine-bio，回復關鍵詞“PEI申(shen)(shen)請”，即可參加(jia)！?用PEI轉染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)時，一(yi)般和(he)DNA的(de)(de)(de)比(bi)例是多少(shao)？非脂質體(ti)PEI轉染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)試(shi)用裝

PEI轉染(ran)試(shi)劑(ji)是線性的(de)好還是分支的(de)好？山東高效率(lv)PEI轉染(ran)試(shi)劑(ji)試(shi)用裝

1.對(dui)(dui)于某些類型的(de)(de)(de)細胞(bao)如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞(bao)，在(zai)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)前(qian)兩(liang)天(tian)鋪(pu)板(ban)可(ke)(ke)顯(xian)著提高(gao)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)入(ru)基因(yin)的(de)(de)(de)表達(da)水平。如果選擇轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)前(qian)兩(liang)天(tian)鋪(pu)板(ban)，可(ke)(ke)適(shi)當降(jiang)低(di)鋪(pu)板(ban)密度，以確(que)保轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)時(shi)細胞(bao)的(de)(de)(de)匯合(he)度仍(reng)為70~80%。2.對(dui)(dui)于接觸抑制敏(min)感的(de)(de)(de)細胞(bao)，可(ke)(ke)適(shi)當降(jiang)低(di)鋪(pu)板(ban)密度。3.即使(shi)(shi)(shi)在(zai)有蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)（如10%的(de)(de)(de)血清）存(cun)在(zai)的(de)(de)(de)情況(kuang)下，DNA-PEI復(fu)合(he)物仍(reng)能轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)細胞(bao)，但是(shi)DNA-PEI復(fu)合(he)物必(bi)須在(zai)無蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)存(cun)在(zai)的(de)(de)(de)條件(jian)下形成。我(wo)們推薦使(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)Opti-MEMITM培養基以達(da)到*轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)效(xiao)率(lv)(lv)。其他的(de)(de)(de)無蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)培養基則需測試(shi)(shi)與線性PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)(shi)劑(ji)的(de)(de)(de)兼容(rong)性。4.對(dui)(dui)大多(duo)數細胞(bao)來(lai)而言(yan)，每1μgDNA使(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)3.0μLEndoFectinTM試(shi)(shi)劑(ji)都能獲得(de)較高(gao)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)效(xiao)率(lv)(lv)。使(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)者也可(ke)(ke)嘗試(shi)(shi)每1μgDNA使(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)1~4μL體積(ji)線性PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)(shi)劑(ji)進行優化。更(geng)多(duo)關于PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)(shi)劑(ji)相關產品(pin)技術問題，歡迎咨(zi)詢(xun)上海曼博生物。?如想申(shen)請PEI試(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)裝，請關注我(wo)們的(de)(de)(de)公(gong)眾號(hao)：Mine-bio，回(hui)復(fu)關鍵(jian)詞“PEI申(shen)請”，即可(ke)(ke)參加(jia)！山東高(gao)效(xiao)率(lv)(lv)PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)(ran)試(shi)(shi)劑(ji)試(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)裝

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