準備(bei)DNA-PEI復(fu)(fu)合(he)物(wu)：DNA、PEI試(shi)劑(ji)(ji)和稀釋(shi)劑(ji)(ji)在進行以下(xia)步(bu)驟前需先使其升(sheng)至(zhi)室(shi)溫(wen)。依(yi)據表1所示，用(yong)(yong)(yong)Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合(he)的(de)無蛋(dan)白培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)稀釋(shi)適量DNA。用(yong)(yong)(yong)同樣(yang)的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)稀釋(shi)PEI試(shi)劑(ji)(ji)。每1μgDNA需用(yong)(yong)(yong)2-5μL線性PEI轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)。一(yi)(yi)邊輕輕渦旋(xuan)裝(zhuang)有DNA溶液的(de)試(shi)管(guan)(guan)，一(yi)(yi)邊將稀釋(shi)的(de)線性PEI轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)滴加至(zhi)試(shi)管(guan)(guan)中(zhong)（注(zhu)意(yi)：請(qing)(qing)勿顛倒(dao)添加順序(xu)）。充分混(hun)勻(yun)后(hou)，室(shi)溫(wen)靜置(zhi)10~25min以形成DNA-PEI復(fu)(fu)合(he)物(wu)。當(dang)溶液體(ti)積較大(da)時(shi)，請(qing)(qing)用(yong)(yong)(yong)圓底聚丙烯管(guan)(guan)，例(li)如Falcon5mL/14mL離(li)心管(guan)(guan)。3.轉(zhuan)染(ran)細(xi)胞：直接向每個孔中(zhong)加入DNA-PEI復(fu)(fu)合(he)物(wu)并輕輕渦旋(xuan)培(pei)(pei)養(yang)(yang)板(ban)/培(pei)(pei)養(yang)(yang)皿。在無血清(qing)條件下(xia)轉(zhuan)染(ran)時(shi)，去除生(sheng)(sheng)長培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)，替換成無血清(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)，然后(hou)滴DNA-PEI復(fu)(fu)合(he)物(wu)。轉(zhuan)染(ran)3h后(hou)，添加?體(ti)積的(de)包含(han)30%血清(qing)的(de)生(sheng)(sheng)長培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)。更多關(guan)(guan)于Polysciences PEI相(xiang)關(guan)(guan)內(nei)容歡(huan)迎咨詢(xun)上(shang)海曼博生(sheng)(sheng)物(wu)！如想申請(qing)(qing)PEI試(shi)用(yong)(yong)(yong)裝(zhuang)，請(qing)(qing)關(guan)(guan)注(zhu)我們的(de)公眾(zhong)號：Mine-bio，回(hui)復(fu)(fu)關(guan)(guan)鍵詞“PEI申請(qing)(qing)”，即可參加！?有哪些不錯的(de)PEI轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)品牌？山東高效率PEI轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)試(shi)用(yong)(yong)(yong)裝(zhuang)

PEIMAX粉末(mo)(mo)配置(zhi)方(fang)法(fa)：1)將1gPEIMAX40K放(fang)入(ru)盛有(you)900mL水的(de)(de)(de)玻璃燒杯中；2)放(fang)入(ru)攪拌轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)子，放(fang)置(zhi)于磁力攪拌器上，設置(zhi)攪拌程序(xu)以(yi)形成(cheng)一(yi)個(ge)(ge)較小的(de)(de)(de)漩渦；3)等待(dai)PEIMAX40K完全溶(rong)解，通常需(xu)(xu)要(yao)5分(fen)(fen)(fen)鐘左(zuo)右(you)；4)用(yong)(yong)(yong)25mL塑料(liao)移(yi)液管加入(ru)1N氫氧化(hua)鈉(na)滴定(ding)至(zhi)pH6.9~7.1；5)如(ru)果不小心(xin)超(chao)過(guo)7.1，則使用(yong)(yong)(yong)1N的(de)(de)(de)鹽酸和新(xin)的(de)(de)(de)塑料(liao)移(yi)液管將pH重新(xin)滴定(ding)至(zhi)6.9~7.1；6)將溶(rong)液轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)移(yi)到1L玻璃量(liang)(liang)筒中，加入(ru)水定(ding)容至(zhi)1L；7)用(yong)(yong)(yong)無菌真空過(guo)濾膜過(guo)濾配制的(de)(de)(de)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)溶(rong)液；8)按需(xu)(xu)分(fen)(fen)(fen)裝(zhuang)，4°C儲存（切(qie)記(ji)不可(ke)(ke)冷凍）；注：未經配制的(de)(de)(de)粉末(mo)(mo)有(you)效(xiao)期為(wei)2年。配置(zhi)成(cheng)液體后(hou)分(fen)(fen)(fen)裝(zhuang)在(zai)合適的(de)(de)(de)瓶子中，并且保(bao)(bao)存在(zai)4℃的(de)(de)(de)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)將可(ke)(ke)在(zai)6個(ge)(ge)月之內(nei)保(bao)(bao)持性(xing)(xing)能。如(ru)jin用(yong)(yong)(yong)于蛋(dan)白定(ding)性(xing)(xing)研究，分(fen)(fen)(fen)裝(zhuang)的(de)(de)(de)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)可(ke)(ke)延長有(you)效(xiao)使用(yong)(yong)(yong)期至(zhi)1年。如(ru)想申請(qing)PEI試(shi)用(yong)(yong)(yong)裝(zhuang)，請(qing)關(guan)注我(wo)們的(de)(de)(de)公(gong)眾號：Mine-bio，回復關(guan)鍵詞(ci)“PEI申請(qing)”，即可(ke)(ke)參加！非脂質體PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)試(shi)用(yong)(yong)(yong)裝(zhuang)可(ke)(ke)高效(xiao)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)多種類型細(xi)胞PEI MAX 是一(yi)款(kuan)高度(du)濃縮(suo)的(de)(de)(de)粉劑(ji)(ji)(ji)(ji)，大量(liang)(liang)科學家選擇PEI MAX ，在(zai)內(nei)部自(zi)行制備低成(cheng)本高效(xiao)益的(de)(de)(de)PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)(ji)(ji)。

接種細(xi)(xi)胞(bao)(bao)：轉(zhuan)染(ran)前，用膠原(yuan)酶(mei)（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xi)(xi)胞(bao)(bao)并計數（不(bu)建議用胰酶(mei)）。調整細(xi)(xi)胞(bao)(bao)濃度，將(jiang)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)鋪入細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)的(de)(de)器皿，每(mei)(mei)個孔置入的(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)量(liang)應(ying)能(neng)使轉(zhuan)染(ran)時(shi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)匯合(he)度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合(he)物(wu)：DNA、PEI試(shi)(shi)劑(ji)和稀釋(shi)劑(ji)在進行以下步驟前需(xu)先使其(qi)升至室溫。依據表1所示(shi)，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其(qi)他適合(he)的(de)(de)無(wu)蛋白培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)稀釋(shi)適量(liang)DNA。用同樣(yang)的(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)稀釋(shi)PEI試(shi)(shi)劑(ji)。每(mei)(mei)1μgDNA需(xu)用1.5-5μL線性(xing)PEI轉(zhuan)染(ran)試(shi)(shi)劑(ji)(這個需(xu)要(yao)客戶自行摸索配比(bi)(bi)，每(mei)(mei)一批(pi)轉(zhuan)染(ran)試(shi)(shi)劑(ji)和每(mei)(mei)一批(pi)DNA比(bi)(bi)例可(ke)能(neng)會稍有不(bu)同）。一邊輕(qing)輕(qing)渦旋裝(zhuang)有DNA溶(rong)液的(de)(de)試(shi)(shi)管(guan)，一邊將(jiang)稀釋(shi)的(de)(de)線性(xing)PEI轉(zhuan)染(ran)試(shi)(shi)劑(ji)滴加至試(shi)(shi)管(guan)中（注(zhu)意(yi)：請勿顛(dian)倒添(tian)加順序）。充分混勻后(hou)，室溫靜(jing)置10~25min以形(xing)成DNA-PEI復合(he)物(wu)。當(dang)溶(rong)液體積較大時(shi)，請用圓底聚丙烯(xi)管(guan)，例如NEST5mL/14mL離心管(guan)。3.轉(zhuan)染(ran)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)：直接向每(mei)(mei)個孔中加入DNA-PEI復合(he)物(wu)并輕(qing)輕(qing)渦旋培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)板(ban)/培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)皿。在無(wu)血(xue)(xue)清(qing)(qing)條(tiao)件下轉(zhuan)染(ran)時(shi)，去除生長培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)，替換(huan)成無(wu)血(xue)(xue)清(qing)(qing)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)，然后(hou)滴DNA-PEI復合(he)物(wu)。轉(zhuan)染(ran)1.5h后(hou)，添(tian)加?體積的(de)(de)包含30%血(xue)(xue)清(qing)(qing)的(de)(de)生長培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)。更多關(guan)(guan)于(yu)Polysciences PEI轉(zhuan)染(ran)試(shi)(shi)劑(ji)，歡迎咨詢曼博生物(wu)！想申(shen)請PEI試(shi)(shi)用裝(zhuang)，請關(guan)(guan)注(zhu)我們的(de)(de)公眾號：Mine-bio，回復關(guan)(guan)鍵詞(ci)“PEI申(shen)請”，即可(ke)參加！

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對(dui)于(yu)某些類型的(de)細(xi)(xi)(xi)胞如(ru)HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xi)(xi)(xi)胞，在轉(zhuan)(zhuan)染(ran)前兩天(tian)鋪(pu)(pu)板可(ke)顯著(zhu)提高轉(zhuan)(zhuan)入基因的(de)表(biao)達水平(ping)。如(ru)果選擇(ze)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)前兩天(tian)鋪(pu)(pu)板，可(ke)適當(dang)降低(di)鋪(pu)(pu)板密(mi)度(du)，以(yi)確保轉(zhuan)(zhuan)染(ran)時細(xi)(xi)(xi)胞的(de)匯合度(du)仍(reng)為70~80%。2.對(dui)于(yu)接觸抑制敏感(gan)的(de)細(xi)(xi)(xi)胞，可(ke)適當(dang)降低(di)鋪(pu)(pu)板密(mi)度(du)。3.即使在有蛋(dan)白（如(ru)10%的(de)血清(qing)）存在的(de)情(qing)況下，DNA-PEI復合物仍(reng)能轉(zhuan)(zhuan)染(ran)細(xi)(xi)(xi)胞，但是DNA-PEI復合物必須在無(wu)蛋(dan)白存在的(de)條件下形成。我們推薦使用(yong)Opti-MEMITM培養基以(yi)達到*轉(zhuan)(zhuan)染(ran)效率。其(qi)他的(de)無(wu)蛋(dan)白培養基則需測試(shi)與線(xian)性(xing)PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)的(de)兼容性(xing)。更多(duo)關(guan)于(yu)PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)相關(guan)產品問題，歡迎(ying)咨(zi)詢上海曼博生(sheng)物！?如(ru)想申(shen)請(qing)(qing)PEI試(shi)用(yong)裝，請(qing)(qing)關(guan)注我們的(de)公眾號：Mine-bio，回復關(guan)鍵詞“PEI申(shen)請(qing)(qing)”，即可(ke)參加！?用(yong)PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)時，一般和DNA的(de)比例(li)是多(duo)少？非(fei)脂質體PEI轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)(ji)試(shi)用(yong)裝

PEI轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)是線性的(de)好還是分支的(de)好？山東(dong)高(gao)效率PEI轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)試(shi)用裝

1.對(dui)于(yu)(yu)某些類(lei)型的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)如(ru)HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，在(zai)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)前(qian)(qian)兩(liang)天(tian)鋪(pu)(pu)板可(ke)顯著提高轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)入基(ji)因的(de)表達水(shui)平。如(ru)果選擇(ze)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)前(qian)(qian)兩(liang)天(tian)鋪(pu)(pu)板，可(ke)適當降(jiang)低(di)(di)鋪(pu)(pu)板密度，以(yi)確(que)保轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)時細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)匯(hui)合(he)(he)度仍(reng)(reng)為70~80%。2.對(dui)于(yu)(yu)接觸抑制敏感的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，可(ke)適當降(jiang)低(di)(di)鋪(pu)(pu)板密度。3.即使在(zai)有蛋(dan)白（如(ru)10%的(de)血(xue)清）存在(zai)的(de)情況下，DNA-PEI復合(he)(he)物(wu)仍(reng)(reng)能轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，但是DNA-PEI復合(he)(he)物(wu)必須在(zai)無蛋(dan)白存在(zai)的(de)條件下形成。我(wo)們推薦(jian)使用(yong)Opti-MEMITM培(pei)養(yang)基(ji)以(yi)達到*轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)效(xiao)率。其他的(de)無蛋(dan)白培(pei)養(yang)基(ji)則需測(ce)試(shi)(shi)(shi)(shi)與線(xian)性PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)的(de)兼容性。4.對(dui)大多數細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)來而言(yan)，每1μgDNA使用(yong)3.0μLEndoFectinTM試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)都能獲(huo)得較(jiao)高轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)效(xiao)率。使用(yong)者也可(ke)嘗試(shi)(shi)(shi)(shi)每1μgDNA使用(yong)1~4μL體積(ji)線(xian)性PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)進(jin)行優化。更多關(guan)于(yu)(yu)PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)相關(guan)產品技術問題，歡迎咨詢上(shang)海曼博(bo)生物(wu)。?如(ru)想申(shen)請(qing)(qing)PEI試(shi)(shi)(shi)(shi)用(yong)裝，請(qing)(qing)關(guan)注我(wo)們的(de)公眾號：Mine-bio，回復關(guan)鍵詞(ci)“PEI申(shen)請(qing)(qing)”，即可(ke)參加！山東高效(xiao)率PEI轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試(shi)(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)試(shi)(shi)(shi)(shi)用(yong)裝

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