免(mian)疫(yi)(yi)(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)技術(shu)(shu)的(de)(de)(de)(de)主(zhu)要(yao)特點是：特異(yi)性(xing)強、敏感性(xing)高、速度快。主(zhu)要(yao)缺點是：非特異(yi)性(xing)染(ran)色問題(ti)尚(shang)未完(wan)全解決，結果判定(ding)(ding)(ding)的(de)(de)(de)(de)客觀性(xing)不(bu)足，技術(shu)(shu)程序也還(huan)比較復雜。熒(ying)(ying)光(guang)(guang)免(mian)疫(yi)(yi)(yi)法(fa)按(an)反應體系及(ji)定(ding)(ding)(ding)量(liang)方(fang)法(fa)不(bu)同，還(huan)可進一(yi)步分做若干(gan)種(zhong)。與放射免(mian)疫(yi)(yi)(yi)法(fa)相比，熒(ying)(ying)光(guang)(guang)免(mian)疫(yi)(yi)(yi)法(fa)無放射性(xing)污(wu)染(ran)，并且大(da)多操作簡便(bian)，便(bian)于(yu)(yu)推廣。國外生(sheng)產的(de)(de)(de)(de)TDM用(yong)(yong)(yong)試劑盒(he)，有(you)相當一(yi)部(bu)分即屬(shu)于(yu)(yu)此類(lei)，并且還(huan)有(you)TDM熒(ying)(ying)光(guang)(guang)偏振免(mian)疫(yi)(yi)(yi)分析(xi)用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)自動分析(xi)儀(yi)生(sheng)產。由于(yu)(yu)一(yi)般(ban)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)測(ce)定(ding)(ding)(ding)中的(de)(de)(de)(de)本底(di)較高等問題(ti)，熒(ying)(ying)光(guang)(guang)免(mian)疫(yi)(yi)(yi)技術(shu)(shu)用(yong)(yong)(yong)于(yu)(yu)定(ding)(ding)(ding)量(liang)測(ce)定(ding)(ding)(ding)有(you)一(yi)定(ding)(ding)(ding)困(kun)難。新發展了幾種(zhong)特殊的(de)(de)(de)(de)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)免(mian)疫(yi)(yi)(yi)測(ce)定(ding)(ding)(ding)，與酶免(mian)疫(yi)(yi)(yi)測(ce)定(ding)(ding)(ding)和(he)放射免(mian)疫(yi)(yi)(yi)分析(xi)一(yi)樣，在臨床(chuang)檢(jian)驗(yan)中應用(yong)(yong)(yong)。免(mian)疫(yi)(yi)(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)技術(shu)(shu)可以用(yong)(yong)(yong)于(yu)(yu)研究細胞(bao)內蛋白質的(de)(de)(de)(de)定(ding)(ding)(ding)位和(he)表達水平。VWF免(mian)疫(yi)(yi)(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)試驗(yan)

免(mian)(mian)疫熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)檢(jian)測(ce)(ce)相對(dui)于(yu)酶(mei)檢(jian)測(ce)(ce)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)優勢(shi)：定(ding)(ding)量(liang)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)信(xin)號的(de)(de)(de)(de)(de)(de)能力（與使用(yong)基于(yu)酶(mei)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方法(fa)進行的(de)(de)(de)(de)(de)(de)定(ding)(ding)性測(ce)(ce)定(ding)(ding)相反(fan)(fan)）；復用(yong)能力（可以(yi)結(jie)合不同發射光(guang)(guang)(guang)譜的(de)(de)(de)(de)(de)(de)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)染料來(lai)檢(jian)測(ce)(ce)多(duo)種(zhong)蛋白質(zhi)(zhi)）；熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)染料的(de)(de)(de)(de)(de)(de)光(guang)(guang)(guang)穩定(ding)(ding)性。免(mian)(mian)疫熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)技術(shu)是根據抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)反(fan)(fan)應(ying)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)理，先將已(yi)知的(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)或(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)標(biao)(biao)記上(shang)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)素，制成熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)，再(zai)用(yong)這(zhe)種(zhong)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)（或(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)）作為探針檢(jian)測(ce)(ce)組(zu)織(zhi)(zhi)或(huo)細(xi)胞內的(de)(de)(de)(de)(de)(de)相應(ying)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)（或(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)）。在組(zu)織(zhi)(zhi)或(huo)細(xi)胞內形成的(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)復合物上(shang)含有標(biao)(biao)記的(de)(de)(de)(de)(de)(de)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)素，利用(yong)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)顯微鏡觀察標(biao)(biao)本，熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)素受外來(lai)激發光(guang)(guang)(guang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)照射而發生(sheng)明亮的(de)(de)(de)(de)(de)(de)熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)（黃綠色或(huo)橘紅色），可以(yi)看見熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)所在的(de)(de)(de)(de)(de)(de)組(zu)織(zhi)(zhi)細(xi)胞，從而確定(ding)(ding)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)或(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)性質(zhi)(zhi)、定(ding)(ding)位(wei)，以(yi)及利用(yong)定(ding)(ding)量(liang)技術(shu)測(ce)(ce)定(ding)(ding)含量(liang)。VWF免(mian)(mian)疫熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)試驗免(mian)(mian)疫熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)技術(shu)可以(yi)通過熒(ying)(ying)(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)信(xin)號顯示和檢(jian)查細(xi)胞或(huo)組(zu)織(zhi)(zhi)內的(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)或(huo)半抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)物質(zhi)(zhi)。

免疫熒(ying)光(guang)通過(guo)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)與(yu)示蹤物質結(jie)合(he)，利用(yong)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)-抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)結(jie)合(he)反應，進(jin)而對抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)所(suo)在的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)或(huo)組織進(jin)行定(ding)性或(huo)定(ding)量。由(you)于熒(ying)光(guang)素所(suo)發(fa)的熒(ying)光(guang)可在熒(ying)光(guang)顯微鏡(jing)下檢(jian)出，熒(ying)光(guang)素受激發(fa)光(guang)的照射而發(fa)出明亮的熒(ying)光(guang)，可以(yi)看見熒(ying)光(guang)所(suo)在的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)或(huo)組織，利用(yong)定(ding)量技術測定(ding)含量，從而可對抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)進(jin)行細(xi)(xi)胞(bao)(bao)定(ding)性和定(ding)位分析(xi)。細(xi)(xi)胞(bao)(bao)免疫熒(ying)光(guang)用(yong)途：快速直觀顯示所(suo)檢(jian)測蛋白的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)定(ding)位。材料(liao)與(yu)儀器(qi)：樣品：貼壁細(xi)(xi)胞(bao)(bao)；試劑：4% 組織固定(ding)液，PBS，Triton X-100，BSA，熒(ying)光(guang)二(er)抗(kang)(kang)(kang)，免疫熒(ying)光(guang)染色(se)二(er)抗(kang)(kang)(kang)稀(xi)釋液，抗(kang)(kang)(kang)熒(ying)光(guang)猝(cu)滅封片(pian)(pian)液，0.25% 胰酶；器(qi)材：6/12/24 孔板(ban)，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)爬片(pian)(pian)（蓋玻(bo)片(pian)(pian)），載玻(bo)片(pian)(pian)，15 ml 離心管。

免(mian)(mian)疫(yi)(yi)(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)法(fa)是將(jiang)免(mian)(mian)疫(yi)(yi)(yi)學方(fang)(fang)法(fa)(抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)特異結(jie)合(he)(he)(he))與(yu)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)標(biao)記(ji)技術(shu)結(jie)合(he)(he)(he)起來研究特異蛋白(bai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)在(zai)(zai)細胞(bao)內分(fen)(fen)布(bu)的方(fang)(fang)法(fa)。由于熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)素(su)(su)所發(fa)(fa)的熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)可在(zai)(zai)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)顯微(wei)鏡下檢出(chu)，從而(er)可對抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)進行細胞(bao)定(ding)位。用免(mian)(mian)疫(yi)(yi)(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)技術(shu)顯示和檢查(cha)細胞(bao)或(huo)組(zu)織(zhi)(zhi)內抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)或(huo)半(ban)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)物(wu)質(zhi)(zhi)等方(fang)(fang)法(fa)稱(cheng)為免(mian)(mian)疫(yi)(yi)(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)細胞(bao)(或(huo)組(zu)織(zhi)(zhi))化(hua)學技術(shu)。免(mian)(mian)疫(yi)(yi)(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)細胞(bao)化(hua)學是根據抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)反應的原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)理，先將(jiang)已(yi)知的抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)或(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)標(biao)記(ji)上熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)素(su)(su)制(zhi)成熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)標(biao)記(ji)物(wu)，再用這種(zhong)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(或(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan))作為分(fen)(fen)子(zi)探針檢查(cha)細胞(bao)或(huo)組(zu)織(zhi)(zhi)內的相(xiang)應抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(或(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti))。在(zai)(zai)細胞(bao)或(huo)組(zu)織(zhi)(zhi)中(zhong)形(xing)成的抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)復合(he)(he)(he)物(wu)上含有熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)素(su)(su)，利(li)用熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)顯微(wei)鏡觀(guan)察標(biao)本，熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)素(su)(su)受(shou)激發(fa)(fa)光(guang)(guang)(guang)(guang)的照(zhao)射而(er)發(fa)(fa)出(chu)明亮的熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)(黃綠色(se)或(huo)桔紅色(se))，可以看見熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)所在(zai)(zai)的細胞(bao)或(huo)組(zu)織(zhi)(zhi)，從而(er)確定(ding)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)或(huo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)的性質(zhi)(zhi)、定(ding)位。免(mian)(mian)疫(yi)(yi)(yi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)技術(shu)是將(jiang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)與(yu)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)(guang)(guang)素(su)(su)等示蹤物(wu)質(zhi)(zhi)結(jie)合(he)(he)(he)，通過(guo)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)反應進行定(ding)位。

細胞(bao)和組織樣品(pin)處理：準(zhun)備熒(ying)(ying)光(guang)(guang)標(biao)(biao)記(ji)的(de)(de)細胞(bao)樣品(pin)：為實現較佳(jia)的(de)(de)圖(tu)像質(zhi)量(liang)，首先應建立(li)針對目(mu)的(de)(de)蛋(dan)白和細胞(bao)結(jie)(jie)構的(de)(de)研(yan)究，同時將(jiang)其他一切背景等排除在圖(tu)像之外(wai)。固定和破(po)膜細胞(bao)樣品(pin)用于(yu)標(biao)(biao)記(ji)–首先將(jiang)細胞(bao)結(jie)(jie)構、蛋(dan)白和核酸固定，然后使(shi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)染料和抗體(ti)滲入到細胞(bao)內(nei)部(bu)，標(biao)(biao)記(ji)目(mu)的(de)(de)靶點。封閉細胞(bao)樣品(pin)，防止(zhi)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)標(biao)(biao)記(ji)物(wu)與研(yan)究無關的(de)(de)蛋(dan)白非特異(yi)性(xing)結(jie)(jie)合(he)，較大限度提高信(xin)噪比。蛋(dan)白封閉液有助(zhu)于(yu)減少(shao)非特異(yi)染色。抗體(ti)能夠取代封閉蛋(dan)白與其表位形(xing)成高親和力(li)(li)結(jie)(jie)合(he)，而封閉液可防止(zhi)樣品(pin)中的(de)(de)低親和力(li)(li)結(jie)(jie)合(he)。免(mian)疫熒(ying)(ying)光(guang)(guang)技術可以同時檢測多個目(mu)標(biao)(biao)分子，通過不(bu)同顏(yan)色的(de)(de)熒(ying)(ying)光(guang)(guang)染料進行標(biao)(biao)記(ji)。VWF免(mian)疫熒(ying)(ying)光(guang)(guang)試(shi)驗

免疫(yi)熒光技術可以用于(yu)研究(jiu)遺傳疾(ji)病和基因表(biao)達調控。VWF免疫(yi)熒光試(shi)驗

免(mian)疫熒(ying)光(guang)(guang)(guang)應(ying)用范圍(wei)：其應(ying)用范圍(wei)極其普遍(bian)，可以測定內分(fen)泌、蛋白(bai)質、多肽(tai)、核酸(suan)、神經遞質、受體(ti)、細胞因(yin)子(zi)、細胞表面(mian)抗原、肉(rou)瘤標志物(wu)、血藥濃度等各種生物(wu)活性(xing)物(wu)質。根(gen)據診(zhen)斷類別，又可分(fen)為(wei)傳染(ran)(ran)性(xing)疾病、內分(fen)泌、藥物(wu)檢(jian)測、免(mian)疫學、血型鑒定等。許多物(wu)質都可產生熒(ying)光(guang)(guang)(guang)現(xian)象，但并非都可用作熒(ying)光(guang)(guang)(guang)色素。只(zhi)有(you)那(nei)些能產生明顯(xian)的熒(ying)光(guang)(guang)(guang)并能作為(wei)染(ran)(ran)料(liao)使用的有(you)機(ji)化合物(wu)才(cai)能稱為(wei)免(mian)疫熒(ying)光(guang)(guang)(guang)色素或熒(ying)光(guang)(guang)(guang)染(ran)(ran)料(liao)。異硫(liu)氰酸(suan)熒(ying)光(guang)(guang)(guang)素為(wei)黃色或橙黃色結(jie)晶粉末，易(yi)溶于水(shui)或酒精等溶劑。分(fen)子(zi)量為(wei)389.4，較(jiao)大吸收光(guang)(guang)(guang)波(bo)長為(wei)490495nm，較(jiao)大發射(she)光(guang)(guang)(guang)波(bo)長520530nm，呈(cheng)現(xian)明亮的黃綠色熒(ying)光(guang)(guang)(guang)。VWF免(mian)疫熒(ying)光(guang)(guang)(guang)試(shi)驗

本文來(lai)自沈陽喜(xi)納多采暖工程(cheng)有限公司：//zjlong.cn/Article/83e399905.html